3T3 - L1 ( الماوس الخلايا الليفية الجنينية )

طرق حفظ الخلايا

( أ ) تجميد الخلايا

1 . إعداد الثقافة المتوسطة التي تحتوي على 10 ٪ DMSO أو الجليسرين ، 10-20 ٪ مصل العجل .

2 . أخذ الخلايا في مرحلة النمو لوغاريتمي ، وإزالة القديمة متوسطة الثقافة وتنظيفها مع برنامج تلفزيوني .

3 - إزالة برنامج تلفزيوني ، إضافة كمية مناسبة ( تغطي سطح طبق الثقافة ) هضم طبقة واحدة من الخلايا .

4 . الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة ، 5 دقائق .

5 - إزالة ، إضافة كمية مناسبة من الثقافة المتوسطة بالتبريد ، تهب بلطف مع القش لجعل الخلايا موحدة ، العد ، ضبط كثافة الخلايا في نهاية المطاف 5 × 106 / مل ～ 1 × 107 / مل .

6 - وضع الخلايا في أنبوب 1 ~ 1.5 مل في كل أنبوب .

7 - تحديد اسم الخلية ، وقت الحفظ بالتبريد و المشغل على الحفظ بالتبريد .

8 - التخزين المجمد : معيار معدل التبريد - 1 - 2 ℃ / دقيقة ؛ عندما تكون درجة الحرارة أقل من - 25 ℃ ، يمكن أن تزيد إلى - 5 ℃ - 10 ℃ / دقيقة . في - 100 ℃ ، يمكن أن تكون مغمورة في النيتروجين السائل بسرعة . كما يمكن أن تحتوي على الخلايا المجمدة في الثلاجة - 20 ℃ لمدة 2 ساعة ، ثم في الثلاجة - 70 ℃ بين عشية وضحاها ، إزالة أنبوب المجمدة ، النيتروجين السائل الحاويات .

معلومات المنتج :

السلع مقدمة :

خطوات التشغيل :

1 ) استبدال نصف أو كامل متوسطة الثقافة 24-48 ساعة قبل التجميد للحفاظ على الخلية في مرحلة النمو المتسارع .

2 ) إعداد الحل بالتبريد ( إعداد قبل الاستخدام ) : آخر أنبوب الطرد المركزي ، إضافة إلى الثقافة المتوسطة ، مصل الدم ، إضافة قطرة قطرة واحدة من dimethylsulfoxide ( دمسو ) إلى 20 ٪ من التركيز ، مما يجعل من ضعف السائل بالتبريد ، وضعت في درجة حرارة الغرفة لاستخدامها .

3 ) الخلايا المستزرعة تم جمعها بواسطة الطرد المركزي ، ثم الخلايا المستزرعة كانت معلقة مرة أخرى مع المصل إضافة متوسطة . 1 مل ) عد تركيز الخلية و معدل البقاء على قيد الحياة قبل التجميد .

4 ) أخذ نفس الكمية من تعليق خلية ، إضافة تعليق خلية ببطء بالتنقيط ، يهز أنبوب اختبار لجعل تعليق خلية ( 5-10 ٪ بعد DMSO ) ، وجعل تركيز الخلية 1-5 × 106cells / مل ، مختلطة بالتساوي ، وملء في المسمى بالتبريد أنبوب ، 1-2 مل / مل ، وأخذ كمية صغيرة من تعليق خلية للكشف عن التلوث . بعد ختم محكم ، تشير إلى اسم الخلية ، الجبر ، التاريخ . ثم يتم تجميد .

ملاحظة :

الخلايا التي تريد الحفاظ عليها بالتبريد يجب أن تكون في حالة جيدة من النمو وارتفاع معدل البقاء على قيد الحياة . اختبار ما إذا كانت الخلايا لا تزال تحتفظ ممتلكاتها قبل الحفظ بالتبريد ، يجب اختبار ما إذا كان إنتاج الأجسام المضادة قبل يوم أو يومين من الحفظ بالتبريد .

2 ) الخلايا يمكن أن تكون مجمدة في النيتروجين السائل لفترة طويلة دون التأثير على نشاط الخلايا . يمكن تخزينها لمدة أشهر في - 70 درجة .

3 ) ، وإيلاء الاهتمام لنوعية cryoprotectant . . . . . . . DMSO يكون كاشف الصف ، العقيم ، عديم اللون ( 0 . تصفية أو شراء مباشرة من المنتجات المعقمة مثل سيغما d-2650 ) في حجم صغير من 5 إلى 10 مل ، والحفاظ على 4 ℃ تجنب الضوء ، لا تذويب عدة مرات . غليسيرول ينبغي أيضا أن يكون كاشف الصف ، والحفاظ على ضوء بعد التعقيم بالبخار ذات الضغط العالي . في غضون سنة واحدة بعد الاستخدام ، لأن التخزين على المدى الطويل يمكن أن تكون سامة للخلايا . في الأسلوب ، مزدوج تجميد تخزين السائل مستعدة أولا ، وبالتالي تجنب الضرر الناجم عن الحرارة المنبعثة من دمسو عندما تضاف مباشرة إلى الخلية . إضافة تعليق خلية ببطء بالتنقيط هو جعل الخلية التكيف مع التوتر تدريجيا ، يمكن أن تقلل من تلف الخلايا . [ الهدف ] للتحقيق في آثار DMSO على تمايز خلايا اللوكيميا خط .

منتجات الشركة للبيع :