الاستنساخ و التعبير عن electrotransfected الخلايا من البكتيريا الأجرعية

EHA105 (pSoup) الخلية الكهربائية

البكتيريا الأجرعية transfected الخلايا

منتوج علامة :

eha105 سلالة ; آگرو الخلايا المختصة . ريفامبيسين ( ريف ) ليفو بينغ؛ كاناميسين ( كان ) كانامي سو؛ EHA101； LBA4404； GV3101； AGL1； دراسات على النباتات المعدلة وراثيا .

طلب المنتج :أكبر التعبئة والتغليف أو المنتج المسائل التقنية ،

وصف المنتج :

إن eha105 السلالة المعدلة من eha101 السلالة ، كروموسوم الخلفية C58 ، الجينات النووية تحتوي على علامة الفرز rifuping الجينات المقاومة ريف ، من أجل تسهيل عملية التحول ، هذه السلالة تحمل العنبر القلوية تي البلازميد ( peha105 ptibo542dt-dna ) التي لا تملك وظيفة النقل الذاتي . هذا البلازميد يحتوي على الجينات ( vir-dna t-dna ضروري لإدخال عنصر في جينوم النبات ، على الرغم من أن peha105 ( ptibo542dt-dna ) البلازميد الحمض النووي نقل وظيفة يمكن أن تساعد في نقل الحمض النووي المزدوج بلازميد الحمض النووي . إن eha105 ( psoup ) سلالة يمكن أن تساعد في تكرار pgs2 البلازميد ، 62sk ، في البكتيريا الأجرعية ، وفي الوقت نفسه ، يمكن أن تعطي مقاومة التتراسيكلين ( تيتر ) من سلالة ، والتي يمكن تطبيقها على النباتات المعدلة وراثيا مثل الأرز والتبغ .

إن eha105 ( psoup ) electrotransfected الخلايا المستشعرة التي تقدمها الشركة هي مناسبة خاصة بالنسبة البلازميد التحول . النمط الوراثي هو C58 ( ريفر ) تي peha105 ( psup ) ( ptibo542dt-dna ) succinamopine ( psup-tetr ) كفاءة التحويل > 105cfu / ميكروغرام الحمض النووي تم الكشف عنها من قبل pgs2 البلازميد .

مكونات المنتج :

شروط الحفظ والنقل :

الحفاظ على : 80 ℃ لمدة سنة واحدة .

: الثلج الجاف النقل .

ملاحظة

1 ) ينبغي الحفاظ على الخلايا الحساسة في - 80 ℃ ، لا ينبغي أن تتكرر في التجميد والذوبان والتخزين لفترة طويلة جدا ، وذلك لتجنب انخفاض كفاءة التحويل من الخلايا الحساسة .

2 ) كامل عملية التحويل تتم بدقة وفقا لمتطلبات درجة الحرارة المقابلة والعقم الشرط .

حجم البلازميد لا ينبغي أن يكون أكثر من 1 / 10 من حجم مقبول . البلازميد هو نجس أو ملوثة مع المواد العضوية مثل الإيثانول ، مما يؤدي إلى انخفاض حاد في كفاءة التحويل . البلازميد تضاعف كفاءة التحويل انخفض من حجم النظام .

4 ) لضمان كفاءة التحويل عالية زوي ، ينبغي أن تكون العملية برمتها لينة قدر الإمكان ، والحفاظ على درجة حرارة منخفضة .

5 ) تحويل تركيز عال من البلازميد يمكن أن تقلل من الجرعة النهائية من الطلاء وفقا لذلك .

6 ) عندما استنساخ الكثافة على لوحة كبيرة جدا ، بسبب نقص التغذية ، استنساخ ينمو ببطء ، مستعمرة يصبح أصغر . من أجل الحصول على مستعمرة كبيرة ، جرعة من البلازميد ينبغي تخفيضها .

7 ) إضافة ريفامبيسين في الثقافة المتوسطة لمنع نمو البكتيريا الغريبة وفحص البكتيريا الأجرعية . تي بلازميد يمكن منعه من الضياع عن طريق إضافة streptavidin أو qingdamei حسب سلالة مقاومة ، ولكن streptavidin ليست جيدة في عملية التحول الجيني آگرو . . . . . . .

8 ) لسلامتك وصحتك ، يرجى ارتداء ملابس المختبر وارتداء القفازات القابل للتصرف للتشغيل .

طريقة الاستخدام

1 ) 0.1 سم صدمة كهربائية كأس غطاء مأخوذ من تخزين السائل ووضعها رأسا على عقب على ورقة نظيفة امتصاص الماء لمدة 5 دقائق ، بعد أن استنزفت المياه ، يتم وضعها بشكل إيجابي لمدة 5 دقائق ، الإيثانول تماما تطاير نظيفة ، على الفور إدراجها في الجليد ، ضغط سطح الجليد ، أعلى من القطب الكهربائي كأس 0.5 سم من سطح الجليد لتسهيل تغطية كأس ، والجليد في وضع ثابت لمدة 5 دقائق كافية لتبريد .

2 ) الخلايا المستشعرة من - 80 ℃ أضيفت إلى الجليد لمدة 5 دقائق حتى يذوب .

3 ) إضافة 0.01 ~ 1 ميكروغرام ( حجم أقل من 6 ميكرولتر ) بلازميد الحمض النووي في 50 ميكرولتر من الخلايا المستشعرة عن بعد تعليق ، ثم ضرب أنبوب أسفل مع بو ، ثم تضاف إلى الجليد على الفور . ضربة خفيفة من بندقية خلط الخلايا الحساسة البلازميد ثم نقلها بسرعة إلى صدمة كهربائية كأس ، كأس غطاء ، أنبوب الهواء الاحتفاظ لاستخدامها .

4 ) بدء electrorotating الصك ، تعيين المعلمة : ج = 25 μ و ، الكمبيوتر = 200 أوم ، ت = 2400 الخامس ( هذه المعلمة تشير إلى بيو راد ، يرجى الرجوع إلى الخطوات الموصى بها من electrorotating الصك على وجه التحديد استخدام العملية ) ، وضع صدمة كهربائية كأس في electrorotating الأخدود بسرعة ، صدمة كهربائية الانتهاء من الإدراج السريع في الجليد .

5 ) إضافة 700 μ ل رطل بدون المضادات الحيوية ونقلها إلى أنبوب أجوف ، مثقف في 28 ℃ لمدة 2 ~ 3 ساعات .

6 ) 6 ، 000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 1 دقيقة ، وترك حوالي 100ul طاف ، ثم استخدام بندقية ضربة خفيفة على تعليق الثقيلة . ثم تضاف إلى رطل أو YEB لوحة تحتوي على المضادات الحيوية المناسبة ، بلطف تطبيق الخلايا بالتساوي مع العقيم الزجاج بار . في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق ، بعد امتصاص السائل ، مقلوب لوحة الثقافة لمدة 2-3 أيام في 28 ℃ . . . . . . . [ ملاحظة : عندما لوحة تحتوي فقط على المضادات الحيوية المزدوجة الناقل المستخدمة في التحول ، يمكن أن تكون مثقف في 28 ℃ لمدة 48 ساعة . عند إضافة المضادات الحيوية في لوحة ، إضافة 10 ميكروغرام / مل ريفو في 28 ℃ لمدة 48-60 ساعة ، إضافة 20 ميكروغرام / مل ريفو في 28 ℃ لمدة 60-72 ساعة ، وليس من المستحسن استخدام أكثر من 20 ميكروغرام / مل ريفو في لوحة أو سائل الثقافة .

7 ) الهدف من استنساخ ثقافة السائل :

ي كمية صغيرة من البكتيريا يهز : إضافة 1 مل رطل سائل الثقافة المتوسطة التي تحتوي على المضادات الحيوية المقابلة إلى 15 مل جولة أسفل أنبوب التهوية ، واختيار واحد أو اثنين من المستعمرات تلقيح من مثقف حديثا لوحة ، 30 ℃ و 200 دورة في الدقيقة يهز البكتيريا 24-48h . . . . . . .

كمية كبيرة من البكتيريا : 100 مل تهوية زجاجة الثلاثي مع أقل من 20 مل رطل من المضادات الحيوية التي تحتوي على المقابلة متوسطة الثقافة السائلة ، تأخذ نسبة 2 ٪ من البكتيريا الصغيرة ، 30 ℃ ، 200 دورة في الدقيقة من البكتيريا 24-48 ساعة .

[ ملاحظة ] : البكتيريا الأجرعية ( الهوائية ) ، سواء كانت لوحة صلبة أو سائل يهز البكتيريا تحتاج إلى الكثير من الأوكسجين . مفتاح نجاح السائل يهز البكتيريا هو التأكد من أن وسائل الإعلام تحتوي على ما يكفي من الأوكسجين المذاب ، يمكن السيطرة عليها من خلال الطرق التالية : ي باستخدام أنبوب تنفس أو زجاجة ؛ ( ك ) ضمان أن يكون الحل المغذي عريضا وسمكا صغيرا؛ ل المضادات الحيوية يجب أن تضاف مع أو بدون تركيز منخفض قدر الإمكان .

سلسلة الخلايا المستقبلة

الجدول 1 الصلبة والسائلة رطل متوسطة

الجدول 2 الصلبة والسائلة ييب متوسطة

الجدول 3 - حساسية البكتيريا الأجرعية للمضادات الحيوية

- كتابة / تحرير من قبل v.shallan [ جميع الحقوق محفوظة MKBIO ماو كانغ ]

شنغهاي Maokang التكنولوجيا الحيوية المحدودة هي شركة تعمل في مجال علوم الحياة والتكنولوجيا الحيوية في مجال البحوث والكواشف والأجهزة والمواد الاستهلاكية مختبر الخدمات التجريبية ، تعمل اساسا في مجال بيولوجيا الخلية ، علم النبات ، علم الأحياء الجزيئي ، علم المناعة ، الكيمياء الحيوية ، البروتيوميات . الصيدلانية البيولوجية والكواشف التشخيصية البحث والتطوير والإنتاج . الشركة يلتصق إلى ال " الناس المنحى ، والصدق والثقة العقد " فلسفة العمل . التمسك بمبدأ " ضمان الجودة " لتزويد عملائنا مع منتجات ذات جودة عالية .