الجرذ الخلايا الأولية

الجرذ الخلايا الأوليةطريقة مرور

الهضم مرور خلية ملتصقة

1 ، امتصاص أو صب زجاجة من الثقافة القديمة .

2 ، إضافة حوالي 1 مل من السائل الهضمي ( EDTA مختلطة مع السائل ) برفق يهز ثقافة زجاجة ، زجاجة أسفل الخلية مغمورة في الحل .

3 - بعد 2-5 دقائق من الهضم ، ثقافة زجاجة وضعت تحت المجهر لمراقبة ، وجدت أن الخلايا في جدار adhesives تميل إلى أن تكون الجولة تدريجيا ، في حين لا يزال لا يطفو ، التخلي عن هضم السائل ، إضافة إلى الثقافة المتوسطة لوقف الهضم .

4 ، مع أنبوب الشفط سوف عصا جدار الخلية في مهب إلى تعليق ، على التوالي ، تلقيح في اثنين أو ثلاثة آخرين من زجاجات الثقافة ، 37 ℃ في حاضنة الثقافة لمواصلة الثقافة . في اليوم التالي ، نمو الجدار لوحظ .

مرور تعليق الخلايا

مرور مباشر

1 ) ترك تعليق خلية يترسب ببطء في الجزء السفلي من الزجاجة ، سوف تمتص طاف 1 / 2-2 / 3 .

2 ) ضربة مع القش على شكل تعليق الخلية ، على التوالي ، تلقيح في اثنين أو ثلاثة آخرين من زجاجات الثقافة ، الثقافة في 37 ℃ حاضنة .

2 - الطرد المركزي مرور

1 ) نقل الخلايا جنبا إلى جنب مع الثقافة المتوسطة في أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي 800-1000rpm ، 5 دقائق .

2 ) إزالة طاف ، إضافة ثقافة جديدة متوسطة في أنبوب الطرد المركزي ، وضرب مع القش لجعله على شكل تعليق خلية .

3 ) تعليق خلية تلقيح في اثنين أو ثلاثة أخرى من زجاجات الثقافة ، على التوالي ، ومثقف في 37 ℃ حاضنة .

الجرذ الخلايا الأوليةخمسة أخطاء شائعة في الثقافة

خطأالخلايا الأولية من أنبوب صغير مذاب في حمام مائي لفترة من الوقت

تصحيحالخلايا الأولية هي حساسة جدا عملية الذوبان ، لذلك من المهم أن نضع قارورة في حمام مائي في 37 ℃ والحفاظ على تدوير بلطف حتى المحتوى قد ذاب . قارورة ينبغي إزالتها فورا من حمام الماء ونقلها إلى العقيم الجدول . تأكد من أن الثقافة الخاصة بك زجاجة جاهزة قبل ذوبان الجليد بحيث يمكن استخدامها على الفور لتطعيم الخلايا ووضعها في حاضنة .

خطأالطرد المركزي الخلايا الأولية مباشرة بعد ذوبان قارورة

تصحيحنحن لا نوصي الطرد المركزي الخلايا بعد ذوبان الجليد ، لأن إجراءات الطرد المركزي هي أكثر ضررا من كمية صغيرة من بقايا DMSO . نضع في اعتبارنا أن استبدال وسائل الإعلام في اليوم التالي بعد استعادة الخلايا الأولية لإزالة أي بقايا DMSO .

خطأتسمح الخلايا الأولية تصبح مفرطة في الانصهار

تصحيحعندما تنمو إلى 100 ملتقى الخلايا الأولية يمكن أن تصبح قديمة . تذكر أن الخلايا الأولية ليست نقية 100 ، لذلك من المهم للحد من نمو الخلايا الملوثة . ونحن نوصي أن الخلايا الأولية يمكن أن يكون مثقف في 90-95 ٪ الانصهار .

خطأالخلايا الأولية يمكن بسهولة إعادة تجميد

تصحيحفي كثير من الأحيان ، ونحن لا نوصي بالتبريد الخلايا الأولية ، لأنها يمكن أن تعزز الشيخوخة الخلوية و / أو تؤدي إلى تغييرات وظيفية . الخلايا الأولية هي حساسة جدا ، وإعادة تجميد يمكن أن يؤدي إلى موت الخلايا أو الإصابة .

خطأالخلايا الأولية يمكن أن تتكاثر إلى أجل غير مسمى

تصحيحعلى عكس خطوط الخلايا ، الخلايا الأولية محدودة القدرة على التضخيم . نوصي باستخدام الخلايا الأولية في أقرب وقت ممكن لمنع الانجراف الجيني . وبالإضافة إلى ذلك ، إذا كنت تستخدم نوع من الخلايا التي من الصعب أن تنمو ، يجب أن تراقب عن كثب مورفولوجيا الخلايا ، لأن كمية صغيرة من الخلايا المختلطة ( مثل الخلايا الليفية ) قد تنمو مع مرور الوقت بكميات كبيرة وبالتالي تصبح الخلايا الرئيسية .