fitc-annexin الخامس / بي موت الخلايا المبرمج كيت

fitc-annexin الخامس / بي موت الخلايا المبرمج كيت

رقم المنتج :F6012L

مواصفات المنتج :100 طن

ظروف التخزين :

4℃من فضلك لا تجمد .تاريخ انتهاء الصلاحيةمنتدى

الخصائص الطيفية :

FITC-Annexin V: Ex/Em = 494/518 نانومتر

PI: Ex / Em = 535/617 نانومتر (مع الحمض النووي)

منتوج عرض :

FITC-Annexin V/PIموت الخلايا المبرمج كيت يوفر طريقة سريعة وبسيطة عن طريق وضع العلامات في وقت مبكر من موت الخلايا المبرمج للخلايا ( الأخضر ) و نخر أو موت الخلايا المبرمج للخلايا في وقت متأخر( الأحمر ) كشف مستوى الخلايا . المنتجات التي يمكن الكشف عنها باستخدام التدفق الخلوي أو غيرها من معدات الكشف عن مضان .

الأنكسين الخامسStaun غشاء- الخامسالوزن الجزيئي35-36KDق 2كا2 +فسفوليبيد البروتين ملزمة ، فسفوليبيد أسيل )PSانتقائية ملزمة .فوسفاتيديل )PSوزعت بشكل رئيسي في الجانب الداخلي من غشاء الخلية ، وهذا هو ، على الجانب المجاور السيتوبلازم . في المراحل المبكرة من موت الخلايا المبرمج ، أنواع مختلفة من الخلاياالأسيل أروح على سطح الخلية ، يتعرض إلى البيئة خارج الخلية . الأخضر مسبار الفلورسنتFITCعلامةالأنكسين الخامسأيFITC - الملحق الخامس，فوسفاتيديل مع أروح )PSفي هذه الدراسة ، ونحن استخدام التدفق الخلوي ( FCM ) أو مضان المجهر ( FCM ) للكشف عن خصائص هامة من الخلايا .التوقيع . بالنسبة للخلايا نخر أو موت الخلايا المبرمج في وقت متأخر ، كما تم تدمير سلامة الخلية ،FITC - الملحق الخامسيمكن أن تدخل في السيتوبلازم وPSوهكذا ، الخلايا نخرية تظهر مضان أخضر .

propidine يوديد )يوديد البروبيديوم، PIهوالحمض النوويجنبا إلى جنب مع الأصباغ ، فإنه يمكن تلطيخ الخلايا نخرية أو الخلايا التي فقدت سلامة غشاء الخلية في وقت متأخر من موت الخلايا المبرمج .نواة الخلية .بييمكن أن يكون488、532 أو .546 نانومترمتحمس من قبل الليزر الأحمر مضان .

طريقة الاستخدام :

1 . تصميم التجربة :

أنبوب فارغ : السلبية مجموعة مراقبة الخلايا ، لاFITC-Annexin V/PIتستخدم لتنظيم الجهد .

تلطيخ واحد : مجموعة مراقبة إيجابية الخلايا ، فقط إضافةFITC-Annexin V/إضافة فقطبيتستخدم لتنظيم التعويض .

الكشف عن الأنابيب : الخلايا المعالجة ، بالإضافة إلىFITC-Annexin V/PIبعد تنظيم الجهد التعويض مع فارغة أنبوب واحد صبغ أنبوب ، تدفق البيانات المطلوبة يتم الحصول عليها .

2 . جمع الخلايا :

( 1 ) بالنسبة للخلايا المعلقة :

أ.بعد تحفيز الخلايا ،1000 دورة في الدقيقةطرد مركزي5 دقايق، تجاهل طاف ، وجمع الخلايا ، واستخدامPBSتعليق الخلايا بلطف و عد . ملاحظة :PBSتعليق الثقيلة لا يمكن حذفها ،PBSوفي الوقت نفسه ، فإنه يمكن أيضا أن تلعب دورا في غسل الخلايا .FITC-Annexin الخامسالاتحاد .

ب.取س4 س5خلية معلقة ،1000 دورة في الدقيقةطرد مركزي5 دقايقتخلى عن طاف ، الانضمام100 ميكرولتر 1 × Annexin Vالجمع بين عازلة بلطف إعادة تعليق الخلايا .

ج.انضمام5 ميكرولتر FITC-Annexin V، مزيج بلطف .

د.انضمام5 ميكرولتر PIتلطيخ السائل ، مزيج بلطف .

هـ.درجة حرارة الغرفة( 20-25 درجة مئوية )تجنب ضوء الحضانة10 - 15 دقيقةيمكن استخدام رقائق الألومنيوم لتجنب الضوء . تعليق الخلايا أثناء الحضانة2-3من أجل تحسين تأثير الصباغة .

( 2 ) الخلايا الملتصقة :

أ.امتص خلية ثقافة متوسطة في مناسبة أنبوب الطرد المركزي ،PBSغسل الخلايا الملتصقة مرة واحدة ، إضافة كمية مناسبة من السائل الهضمي(لا تحتوي علىEDTA )خلايا الجهاز الهضمي . احتضان في درجة حرارة الغرفة حتى ضربة خفيفة يمكن أن تجعل خلايا ملتصقة ضربة أسفل ، تمتص الخلايا عصير الهضم . الإفراط في الهضم يجب تجنبها . ملاحظة : هضم الخلايا الملتصقة خطوة حاسمة . إذا كان الجهاز الهضمي وقت قصير جدا ، تحتاج الخلية إلى ضربة قوية يمكن أن تسقط ، من السهل أن يسبب تلف غشاء الخلية ، مما يؤدي إلى إيجابية كاذبة نخر الخلية . إذا كان الجهاز الهضمي وقت طويل جدا ، فإنه من السهل أن يسبب تلف غشاء الخلية ، مما يؤدي إلى إيجابية كاذبة نخر الخلية ، حتى تؤثر علىFITC-Annexin الخامسوبالتالي تتداخل مع الكشف عن الخلايا .

ب.إضافة ثقافة الخلية المتوسطة التي تم جمعها في الخطوة السابقة ، ضربة بلطف أسفل الخلية ونقلها إلى أنبوب الطرد المركزي ،1000 دورة في الدقيقةطرد مركزي5 دقايق، تجاهل طاف ، وجمع الخلايا ، واستخدامPBSتعليق الخلايا بلطف و عد . ملاحظة : من المهم جدا أن نضيف ثقافة الخلية المتوسطة في الخطوة السابقة ، من ناحية ، يمكن جمع الخلايا أو الخلايا الميتة التي علقت بالفعل ، من ناحية أخرى ، المصل في ثقافة الخلية المتوسطة يمكن أن تمنع بشكل فعال أو تحييد بقايا . بقايا هضم وتدهور بعد إضافةFITC-Annexin الخامسمما أدى إلى فشل الصباغة .

ج.取س4 س5خلية معلقة ،1000 دورة في الدقيقةطرد مركزي5 دقايقتخلى عن طاف ، الانضمام100 ميكرولتر 1 × Annexin Vالجمع بين عازلة بلطف إعادة تعليق الخلايا .

د.انضمام5 ميكرولتر FITC-Annexin V، مزيج بلطف .

هـ.انضمام5 ميكرولتر PIتلطيخ السائل ، مزيج بلطف .

و.درجة حرارة الغرفة(20-25 درجة مئوية)تجنب ضوء الحضانة10 - 15 دقيقةيمكن استخدام رقائق الألومنيوم لتجنب الضوء . تعليق الخلايا أثناء الحضانة2-3من أجل تحسين تأثير الصباغة .

3 - تحليل النتائج :

( 1 ) قياس التدفق الخلوي :

بعد الحضانة ، 400 μ ل 1 × Stannexin الخامس يمكن أن تضاف مباشرة إلى تعليق الخلايا ، على الفور ، fitc Stannexin الخامس كان متحمس من 488 نانومتر ليزر ، مضان الطيف الانبعاثات في 530 نانومتر ( fitc القناة ) ، بي قناة الطيف الانبعاثات حوالي 617 نانومتر .

( fitc-annexin v-pi / - ) ، الخلايا الحية في الربع السفلي الأيسر ، كما هو مبين في مخطط مبعثر من ثنائي قياس التدفق الخلوي . في وقت مبكر من موت الخلايا المبرمج ( fitcannexin الخامس + / بي - ) في الربع السفلي الأيمن . في الجزء العلوي من اليمين ( fitc-annexin الخامس + / بي + ) نخر الخلايا في وقت متأخر . في الربع العلوي الأيسر ، الخلية النووية العارية ( fitc-annexin الخامس / بي + ) .

( 2 ) الكشف المجهري مضان :

أ - 1000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، وجمع الخلايا ، مع 400 ميكروغرام / لتر 1 × Stannexin الخامس جنبا إلى جنب مع العازلة بلطف تعليق الخلايا . بعد نقل الخلايا إلى 96 مسام لوحة لفترة من الوقت أو بعد مسحة الخلايا ، لاحظ تحت المجهر مضان .

fitc-annexin الخامس يمكن تطبيقها مع fitc مرشحات ، بي يمكن تطبيقها مع CY3 أو تكساس مرشحات .

ملاحظة :

1. قبل الاستخدام ، يرجى فورا طرد المنتج إلى أسفل الأنبوب ، ثم إجراء مزيد من التجارب .

2. من أجل الحد من عملية موت الخلايا المبرمج ، عملية الحضانة يمكن أن تعمل على الجليد30 دقيقةمنتدى

3. لأن موت الخلايا المبرمج هو عملية سريعة ، فمن المستحسن أن عينةساعة واحدةفي التحليل .

4. الهضم هو خطوة رئيسية في خلايا ملتصقة . إذا كان هناك خلايا عائمة في الخلايا التي يسببها الخلايا الملتصقة ، العائمة الخلايا الملتصقة يجب جمعها وتلطيخ . عند التعامل مع الخلايا الملتصقة ، يجب الحرص على تجنب إصابة الخلايا البشرية . الجهاز الهضمي وقت قصير جدا ، تحتاج الخلية إلى ضربة قوية يمكن أن تسقط ، من السهل أن يسبب تلف غشاء الخلية ،بيالإفراط في تناول الطعام . فترة طويلة من الهضم ، غشاء الخلية من السهل أيضا أن يسبب الضرر ، حتى يمكن أن تؤثر على غشاء الخلية فسفوليبيدFITC-Annexin الخامسعقدة . عندما يتم هضمها ، الجزء السفلي من لوحة مثقبة مليئة تماما اتصلت مع الخلية عندما يهز برفق ، ثم الجزء الأكبر هو سكب ، و الجزء المتبقي من لوحة مثقبة ثم يهضم لفترة من الوقت . حاول أن لا تستخدم في الجهاز الهضمي .EDTAوEDTAسوف تؤثر علىالأنكسين الخامسمع .PSالاتحاد .

5. بعد هضم خلايا ملتصقة ، فمن المستحسن أن حوالي30 دقيقةبعد تلطيخ ، وتجنب ايجابيات كاذبة .

6. من أجل تجنب فقدان الخلايا أثناء غسل الخلايا الكبيرةنصيحةغطاء الرأس صغيرنصيحةرئيس شفط .

7. تركيز الصبغ يتحدد متطلبات محددة من التجارب .

8. هناك مشكلة التبريد في الأصباغ الفلورية . يرجى تجنب الضوء قدر الإمكان أثناء التخزين والاستخدام من أجل إبطاء التبريد الفلورية .

9. من أجل سلامتك وصحتك ، يرجى ارتداء ملابس المختبر و القفازات القابل للتصرف .