فحص الخلايا الإيجابية تحرير الجينات

قابلة للتفاوضتحديث03/04

نموذج

طبيعة المصنع: المنتجين

فئة المنتج

مكان المنشأ

استشارة عبر الإنترنت

نظرة عامة

فحص الخلايا الإيجابية تحرير الجينات يشير إلى تحديد وعزل الخلايا المعدلة وراثيا بنجاح بعد تحرير الجينات التجربة ( على سبيل المثال ، crispr / cas9 ) . الأساليب الشائعة تشمل فحص المضادات الحيوية ( على سبيل المثال ، باستخدام الجينات المقاومة علامة ) ، بروتين فلوري علامة الفحص ، بكر أو تسلسل التحقق . هذه العملية أمر بالغ الأهمية من أجل الحصول على homozygote أو هيتيروزيجوسيتي متحولة خطوط الخلايا ، دراسة وظيفة الجينات ، أو بناء نموذج المرض .

تفاصيل المنتج

فحص الخلايا الإيجابية تحرير الجينات: الاستراتيجية التكنولوجية وعملية التحسين

فحص الخلايا الإيجابية هي واحدة من الخطوات الأساسية في تحرير الجينات .

أولاً - أهداف وتحديات الفرز

الهدف الأساسي

بنجاح تحرير الخلايا ( على سبيل المثال ، بالضربة القاضية / كو ، ضرب / كي ) المعزولة من السكان مختلطة من الخلايا .
القضاء على نوع البرية تدخل الخلية ( نسبة عالية من الخلايا غير المحررة ، من السهل أن يؤدي إلى سلبية كاذبة ) .

التحديات الرئيسية

تلف الخلاياالفحص على المدى الطويل يؤدي إلى شيخوخة الخلايا ( انخفاض حاد في القدرة على الانتشار بعد مرور الخنازير الليفية ) .
مخاطر إيجابية كاذبةتحرير جزئي لا وان يدمر تماما وظيفة الجين ( على سبيل المثال ، تحول رمز الطفرات لا تسبب فقدان وظيفة ) .
تدفق عنق الزجاجةالثقافة التقليدية يتطلب أكثر من 22 يوما ، و معدل الإيجابية أقل من 20 ٪ .

تعميم تكنولوجيا الفرز و العملية

( أ ) تقنيات التخصيب القائمة على نظم الإبلاغ

استخدام آلية إصلاح لتحريك التعبير عن علامات الفلورسنت / المقاومة ، وتحقيق التصور والفرز السريع :

إصلاح آلية	تصميم نظام الإبلاغ	طريقة الفحص	هيمنة	حالة
ديجيتال	استهداف البروتينات الفلورية المنهي التدمير واستعادة التعبير	القوات المسلحة الكونغولية فرز هذه الشراكه ⁺ الخلايا	بديهية وفعالة ، تنطبق على كو	crispr ديي الناقل
HDR	إعادة التركيب مثلي الإدراج الجينات المقاومة ، مثل بورو	فحص المضادات الحيوية الضغط	مناسبة كي ، منخفضة التكلفة	biyuntian crispr البلازميد
SSA	كسر المستحث الصلب سلسلة واحدة إصلاح بروتين فلوري التعمير	قياس التدفق الخلوي	حساسية عالية ، وانخفاض معدل تفوت بالجو	التحقق من تحرير الجينات متعددة

عملية تدفق( خذ nhej-gfp النظام على سبيل المثال ) :

بناء تحتوي علىgfp-taa المنهيناقلات ( SGRNA استهداف تا المنطقة ) .

بعد transfected الخلايا ، nhej إصلاح الضرر المنهي → هذه الشراكه التعبير .

بعد استخدامالتدفق الخلوي ، IQE ®） فرز هذه الشراكه الخلايامنتدى

( 2 ) طريقة سريعة لتحديد microcells

برنامج اختراقتحديد النمط الوراثي يمكن أن تكتمل في 50 الخلايا ، وتقصير دورة أكثر من 15 يوما .

المعالم الرئيسيةس

كمية الخلاياأكثر من 50 ( ف < 0.01 ) .
إنزيم حساسيةt7e1 يمكن الكشف عن كفاءة التحرير أكثر من 5 ٪ .
خطوات التحققتسلسل سانجر يؤكد نوع الطفرة ( مثل الإدراج / الحذف ) .

إنزيم الهضم وتسلسل تقنيات التحقق

طريقة	مبدأ	تنطبق على المشهد	الحد
t7e1 انزيم الهضم	عدم تطابق قطع تنتج heterodyne سلسلة مزدوجة	الفرز الأولي ( منخفضة التكلفة )	حساسية منخفضة ( ≥ 5 ٪ معدل تحرير )
سانجر التسلسل	قراءة تسلسل الطفرات مباشرة	monoclone التحقق	انخفاض تدفق
ارتفاع تدفق التسلسل	عمق التغطية طفرة الموقع المستهدف	تحليل متعدد الجينات / تفوت بالجو	成本高

عملية التحسينس

مختلطة استنساخ preغربالمعدل تحرير السكان تم الكشف عنها من قبل fa-pcr ، ثم استنساخ في قائمة منفصلة عندما كان أكثر من 30 ٪ .

استراتيجية التحقق المزدوج: t7e1 إيجابية استنساخ الشاشة الأولى ثم تسلسل سانجر أكد ( تجنب إيجابية كاذبة ) .

اختيار التكنولوجيا و المشهد المناسب

( أ ) الاختيار حسب نوع الخلية

أنواع الخلايا	طريقة التوصية	مبررات
الخلايا الأولية	تحديد الخلايا الصغيرة	تجنب الشيخوخة الناجمة عن الثقافة على المدى الطويل ( خنزير الخلايا الليفية )
خطوط الخلايا السرطانية	فحص المضادات الحيوية	الانتشار السريع والاستقرار في مقاومة المخدرات
iPSCs	تقرير التنمية البشرية + نظام تسلسل monoclone	الحفاظ على تعدد المهام ، تحتاج إلى تحرير عالية الدقة

` 2 ` الاختيار حسب نوع التحرير

تحرير نوع	تقنية الفرز	المؤشرات الرئيسية
خروج المغلوب ( كو )	nhej-gfp نظام الإبلاغ	هذه الشراكه ⁺ نسبة الخلايا ( التدفق الكمي )
التنصت على الجينات ( كي )	فحص المضادات الحيوية + بكر التحقق	معدل البقاء على قيد الحياة + تضخيم تسلسل المقاومة المرافقة
نقطة تحور ( م )	t7e1 + تسلسل عميق	تردد الطفرة

فحص الخلايا الإيجابية تحرير الجينات

منتج مماثل يوصي