لينتيفيرال تعداء التجربة

قابلة للتفاوضتحديث03/04

نموذج

طبيعة المصنع: المنتجين

فئة المنتج

مكان المنشأ

استشارة عبر الإنترنت

نظرة عامة

لينتيفيرال ترنسفكأيشن التجربة هي تقنية نقل الجينات الأجنبية في الخلايا المضيفة باستخدام ناقلات لينتيفيرال المعدلة وراثيا . لينتيفيرال ( لينتيفيرال ) هو نوع من الفيروس الارتجاعي ، والتي يمكن أن تصيب الخلايا غير المنقسمة ، ويمكن أن تدمج الجينات المستهدفة في الجينوم المضيف ، وتحقيق الاستقرار على المدى الطويل التعبير . هذه التكنولوجيا قد تم تطبيقها على نطاق واسع في مجال البحوث وظيفة الجينات ، والعلاج الجيني ، وإعداد الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها ( IPS ) .

تفاصيل المنتج

واحدلينتيفيرال تعداء التجربةتعريف التكنولوجيا والقيم الأساسية

لينتيفيرال تعداءناقلات لينتيفيرال المعدلة المستخدمة في نقل الجينات الأجنبية إلى الخلايا المستهدفة .التعبير مستقرة على المدى الطويلتقنية إدخال الجينات . وتشمل مزاياها الأساسية ما يلي :

تطبيق واسع الطيف الخليةيمكن أن تصيب الخلايا الإنقسامية وغير انقسام الخلايا ( مثل الخلايا العصبية والخلايا الجذعية والخلايا الأولية ) ، وكسر من خلال تعداء التقليدية القيود .
كفاءة التعبير المتكاملبعد النسخ العكسي الحمض النووي الريبي الفيروسي ، تم دمجها في جينوم المضيف لتحقيق التعبير عن الجينات الخارجية yong-long . . . . . . .
انخفاض المناعةحذف الجينات المسببة للأمراض الفيروسية مثل فيروس نقص المناعة البشريةتاتوريفانخفاض كبير في المضيف الاستجابة المناعية .
سهولة التشغيلالخلايا المصابة مباشرة من خلال جزيئات الفيروس دون معقدة تعداء كاشف .

تحليل المصطلحاتس

ترنسفكأيشنعادة غير الفيروسية بوساطة إدخال الحمض النووي ( على سبيل المثال ، الصعق الكهربائي ، الحويصلية ) .

تنبيغعلى وجه الخصوص ، بوساطة نقل الجينات الفيروسية ، لينتيفيرال التكنولوجيا تنتمي إلى هذه الفئة .

ثانيالينتيفيرال تعداء التجربةالآلية الجزيئية : من تغليف الفيروس إلى التكامل الجيني

( أ ) تكوين ناقلات لينتيفيرال

عنصر	وظيفة .	تطور التكنولوجيا
نقل البلازميد	تحمل جينات أجنبية ( مثل كدنا سهرنا ) والتعبئة والتغليف إشارة	الجيل الثالث الناقل حذفتاتالفيروس المضخم للخلايا المروج يدفع النسخ
التعبئة والتغليف البلازميد	التعبير عن البروتينات الهيكلية الفيروسية ( الفجوة ، بول )	ينقسم إلى اثنين من البلازميدات جاغ / بول و rev ، مما يقلل من خطر إعادة التركيب
البروتين المغلف حبيبة	التعبير عن vsv-g البروتين ( فيروس التهاب الفم الحويصلي ز البروتين ) وتحديد نطاق المضيف	استبدال الغشاء الطبيعي لفيروس نقص المناعة البشرية ، وتوسيع نطاق أنواع الخلايا المصابة
مساعد البلازميد	توفير البروتين القس ، وتعزيز unlinked الحمض النووي الريبي نوى	زيادة إنتاج الفيروس

` 2 ` عملية توصيل الجينات داخل الخلية المضيفة

دخول الفيروسvsv-g البروتين ملزمة غشاء الخلية المستهدفة المستقبلات ( مثل ldlr ) بوساطة غشاء الانصهار .
النسخ العكسي و دخول النواةالحمض النووي الريبي الفيروسي هو عكس النسخ في السيتوبلازم و نقلها إلى النواة عن طريق مجمع ما قبل الاندماج ( PIC ) .
الجينوم التكاملفيروس ( integrase ) إدراج كدنا في الكروموسومات المضيف بشكل عشوائي ، مما يؤدي إلى استمرار التعبير .

عملية التشغيل الموحدة والتكنولوجيا الأمثل

( أ ) تغليف الفيروسات وتنقيتها ( مع 293t الخلايا على سبيل المثال )

خطوة	نقاط التشغيل	معايير مراقبة الجودة
cotransfected البلازميد	أربعة نظام البلازميد ( نقل + تغليف + مساعد ) كان transfected 293t الخلايا .	نقاء البلازميد > 1.8 ( a260 / a280 ) ، لا الذيفان الداخلي
تركيز الفيروس	السرعة الزائدة الطرد المركزي ( 50 ، 000 * ز ) أو شماعة هطول طريقة زيادة عيار 10-100 مرات	تركيز عيار > 1 × 10 ⁸ ifu / مل
قياس عيار	قياس التدفق الخلوي ( مضان مراسل الجينات ) أو ( qpcr عدد نسخ الجينوم الفيروسي )	عيار الفنية ( تو / مل ) > 10 ⁷ المؤهلين

تعداء وفحص الخلايا المستهدفة

تحسين ظروف الإصابةس

polybrene ( 8 ميكروغرام / مل ) أضيفت إلى تعزيز امتصاص الفيروس .
عدوى متعددة ( وزارة الداخلية ) اختبار : عادة وزارة الداخلية = 5-20 ( تعديل حسب نوع الخلية ) .

فحص سلالات مستقرةس

فحص المضادات الحيوية : puromycin ( 1 ميكروغرام / مل ) لمدة 7-14 يوما ، وإزالة الخلايا غير transfected . . . . . . .
monoclone التضخيم : الحصول على خط خلية متجانسة مع طريقة التخفيف المحدودة .

المهارات الرئيسيةس

الخلايا غير المنقسمة ( مثل الخلايا العصبية ) تحتاج إلى إطالة أمد العدوى إلى 72 ساعة .

الخلايا الأولية تشير إلى انخفاض وزارة الداخلية ( ≤ 5 ) لتجنب السمية .

منتج مماثل يوصي