الإنسان خلايا بطانة الاوعية الدموية الدقيقة الشبكية

جميع منتجات الشركة هي التجارب العلمية فقط ، لا تفعل التجارب العلمية الأخرى خارج استخدام !

بطانة الاوعية الدموية الدقيقة الشبكية البشرية معزولة من أنسجة الشبكية . شبكية العين هي الطبقة الداخلية من جدار العين ، وهو فيلم شفافة . شبكية العين يتكون من طبقة من القشرة العليا الصباغ الشبكية الحسية التي يمكن فصلها عن بعضها البعض تحت ظروف مرضية تسمى انفصال الشبكية . epichromatic قشرة المشيمية ترتبط ارتباطا وثيقا ، تتكون من الخلايا الظهارية الصباغ ، والتي يمكن أن تدعم وتغذية خلايا مستقبلة للضوء ، التظليل ، تبديد الحرارة ، وتجديد وإصلاح . تقسيم شبكية العين النسيجيمن الخارج إلى الداخل ، نماذج المنفعة هي على التوالي : صبغات القشرة العليا ، مخروط البصرية ، البصرية قضيب خلية طبقة ، طبقة الغشاء الخارجي ، الخارجي طبقة الحبيبية ، الضفيرة الخارجي طبقة ، طبقة الحبيبية الداخلية ، الداخلية الضفيرة الضفيرة على شكل طبقة ، طبقة خلية العقدة ، الألياف العصبية طبقة ، طبقة الحدود الداخلية الغشاء . الطبقة الداخلية من شبكية العين هو فيلم بطانة على السطح الداخلي من غشاء الأوعية الدموية ، مع وظيفة حساسة للضوء . هناك حليمة العصب البصري على الجانب الخلفي من الأنف . طبقة حسية على شبكية العين يتكون من ثلاث خلايا عصبية . الخلايا العصبية هي طبقة من الخلايا البصرية ، متخصصة في التصوير الفوتوغرافي ، بما في ذلك المخاريط و رود الخلايا . قضيب الخلايا أساسا على شبكية العين التي هي بعيدة عن الحفرة المركزية ، في حين أن معظم المخاريط في الحفرة المركزية . الطبقة الثانية ، ودعا biganglionic الخلايا ، حوالي 10 إلى مئات من الخلايا البصرية من خلال biganglionic الخلايا المرتبطة خلية العقدة المسؤولة عن الاتصال . المستوى الثالث يسمى العقدة طبقة الخلية ، وخاصة التوصيل . شبكية العين هي رقيقة جدا ، ولكن بنية معقدة جدا ، والتي تعلق على الجدار الخلفي من مقلة العين ، ونقل النبضات من الألياف العصبية من شبكية العين المستقبلات عبر سطح شبكية العين من خلال العصب البصري إلى منفذ . القرار من شبكية العين ليست موحدة ، في منطقة البقعة الصفراء ، القرار قوية . هو واحد رقائق مسطحة epithelioid الخلية التي تشكل سطح تجويف الأوعية الدموية - المواد النشطة بيولوجيا التي تنتجها ويفرز لها دور هام في الحفاظ على التوتر الأوعية الدموية ، وتنظيم ضغط الدم ، ومكافحة تجلط الدم ، وهلم جرا . لأن الخلايا البطانية التي تم الحصول عليها من مختلف الأنسجة والأعضاء لها خصائص مختلفة ، هذه الخلايا البطانية لديها وظيفة الحاجز الداخلي في الدماغ والشبكية ، ويلعب دورا هاما في تنظيم الحالة الفسيولوجية الأوعية الدموية ، والإفراج عن المواد الفعالة في الأوعية الدموية و تشكيل الأوعية الدموية الجديدة . . . . . . .
طريقة العرض :

كولاجيناز ، كولاجيناز ، كولاجينازمجموع عدد الخلايا التي تم الحصول عليها من خلال الجمع بين أسلوب محايد دان انزيم الهضم مع كثافة التدرج الطرد المركزي ، وأخيرا من خلال فحص الخلايا البطانية متوسطة الثقافة . خلايا / زجاجات .
اختبار الجودة :

الإنسان خلايا بطانة الاوعية الدموية الدقيقة الشبكيةنقاء cd31 المناعية يمكن أن تصل إلى أكثر من 90 ٪ ، لا تحتوي على فيروس نقص المناعة البشرية - 1 ، الالتهاب الكبدي الوبائي ، سي ، الميكوبلازما ، البكتيريا والخميرة والفطريات .

حالة التغليف PLL（0.1mg/ml）， الجيلاتين ( 0.1 في المائة )

الثقافة المتوسطة احتواءFBS、 إضافات النمو ، penicillin streptomycin , الخ .

تغيير التردد كلتغيير السوائل مرة واحدة في 2-3 أيام

خصائص النمو عصا الجدار

شكل الخلية مثل الخلايا البطانية

خصائص مرور يمكن تمريرجيل

السائل الهضمي 0.25 ٪ يي البروتيني

حالة ثقافة مرحلة الغاز : الهواء ،95%； ثاني أكسيد الكربون، 5 في المائة

الأعمال التحضيرية

1 - إعداد المعدات التجريبية : إعداد أطباق بتري معقمة ، وزجاجات ، ماصات ، أنابيب الطرد المركزي ، والأدوات الجراحية ، وما إلى ذلك ، وإجراء التعقيم أو التعقيم المناسبة الأخرى .

2 - إعداد الكواشف : إعداد أو شراء مناسبة متوسطة الثقافة ، انزيم الهضم ( على سبيل المثال ، كولاجيناز ، وما إلى ذلك ) ، مصل بقري جنيني ، ومضادات الأكسدة وغيرها من الكواشف لضمان أن تكون عقيمة وفعالة .

3 - إعداد الحيوانات المختبرية أو الأنسجة المصدر : اختيار الحيوانات المناسبة وفقا لمتطلبات التجربة ، وإجراء المقابلة التخدير أو الإعدام ، والحصول على الأنسجة المطلوبة . أو الحصول على المنظمة من عينة الأنسجة الموجودة في المكتبة .

أخذ العينات والعلاج

1 . استخراج المواد : تحت ظروف معقمة ، وإزالة الأنسجة المستهدفة بسرعة ، والحد من الضرر على الأنسجة ، وإزالة الدهون الزائدة ، والأنسجة الضامة وغيرها من الأنسجة غير المستهدفة .

2 . تنظيف : إزالة الأنسجة مع ما قبل التبريد العقيم برنامج تلفزيوني شطف عدة مرات لإزالة الدم والشوائب .

3 - القص : قطع الأنسجة إلى قطع صغيرة من حوالي 1-2 ملم مكعب ، من أجل الهضم اللاحقة .

عزل الخلايا

1 - الهضم : قطع قطعة من الأنسجة في أنبوب الطرد المركزي يحتوي على كمية مناسبة من انزيم الهضم الهضم في 37 ℃ يهزّ طاولة أو حاضنة لبعض الوقت . أثناء عملية الهضم ، أنبوب الطرد المركزي يمكن أن يهز بلطف ، مما يجعل الجهاز الهضمي أكثر موحدة .

2 - إنهاء عملية الهضم : عندما يتم هضم معظم الأنسجة في تعليق خلية واحدة أو مجموعة صغيرة من الخلايا ، إضافة المصل تحتوي على وسائل الإعلام لإنهاء عملية الهضم .

3 - الترشيح و الطرد المركزي : استخدام خلية غربال لتصفية تعليق خلية ، وإزالة الأنسجة غير المهضوم شظايا ، ثم تصفية الطرد المركزي في سرعة مناسبة ، وجمع الخلايا هطول .

خلية المراقبة والكشف

1 . المراقبة اليومية : استخدام المجهر المقلوب لمراقبة مورفولوجيا الخلايا ، والنمو ، الكثافة ، وما إلى ذلك ، تسجيل التغيرات في الخلايا ، مثل العثور على الخلايا الملوثة أو غير طبيعي ، في الوقت المناسب لاتخاذ التدابير المناسبة .
2 - عدد الخلايا و الكشف عن النشاط : عند الضرورة ، التريبان الأزرق تلطيخ يمكن استخدامها للكشف عن عدد الخلايا و النشاط من أجل فهم نمو الخلايا و الحالة الصحية .

استخراج وفصل

1 . عملية سريعة

- يجب معالجة الأنسجة مباشرة بعد أخذ العينات ، وتجنب التعرض لفترات طويلة إلى درجة حرارة الغرفة أو البيئة غير الغذائية .

- شطف الأنسجة باستخدام برنامج تلفزيوني معقم أو محلول فسيولوجي لإزالة الدم والشوائب .

2 - اختيار الإنزيمات الهاضمة

- اختيار الإنزيمات الهاضمة وفقا لنوع الأنسجة ، وتجنب الإفراط في الهضم مما يؤدي إلى تلف الخلايا .

- وقت الهضم يجب أن تسيطر عليها بدقة ( عادة 10-30 دقيقة ) ، ويمكن ملاحظة حالة تفكك الخلية بواسطة المجهر .

تحسين ظروف الزراعة

1 - اختيار وسائل الإعلام

- استخدام وسائل الإعلام التي تحتوي على المصل أو بعض عوامل النمو ( على سبيل المثال dmem rpmi 1640 , الخ ) ، بعض الخلايا تحتاج إلى إضافة الأنسولين ، لو ، الخ .

- تجنب تغيير العلامات التجارية أو دفعات من وسائل الإعلام في كثير من الأحيان ، والحد من الإجهاد التكيف الخلوي .

2 . عصا الجدار و مرور

- ضعف قدرة الخلايا الأولية على الالتصاق بالجدران ، وقد تتطلب طلاء أطباق بتري ( مثل الكولاجين ، polylysine ) .

- كثافة مرور الوقت اقترح أن تسيطر على 70 ٪ - 80 ٪ ، والإفراط في التقارب يمكن أن يؤدي إلى تثبيط الاتصال والتمايز .

ثالثاً - مكافحة التلوث

1 . عملية معقمة

- العملية برمتها في مكتب سوبر نظيفة ، واستخدام المواد الاستهلاكية القابل للتصرف ، وتجنب التلوث الصليب .

- يمكن إضافة مقاومة مزدوجة في المتوسط ، ولكن استخدام على المدى الطويل قد تؤثر على نشاط الخلايا .

الكشف عن الميكوبلازما

- الكشف المنتظم عن تلوث الميكوبلازما ( على سبيل المثال ، بكر ) بعد التلوث ، يجب التخلص من الخلايا في الوقت المناسب .

رصد حالة

1 - المراقبة اليومية

- فحص شكل الخلية وكثافتها ولون المتوسط يوميا ، واستبدال المتوسط في الوقت المناسب ( عادة كل 2-3 أيام ) .

- قد تشير الأشكال الشاذة ( مثل الخلايا المستديرة أو الشظايا المتزايدة ) إلى التلوث أو نقص التغذية .

2 - مرور وتجميد

- عدد محدود من انقسام الخلايا الأولية ( عادة 5-10 أجيال ) التي تحتاج إلى وقت مبكر بالتبريد .

- يقترح استخدام DMSO + مصل ( أو متوسطة خاصة للتخزين بالتبريد ) للتخزين بالتبريد مع النيتروجين السائل بعد التدرج في درجة الحرارة .